BROADCASTS.com

b'Die regulatorischen F\\xe4higkeiten des RNS-Bindeproteins CHLAMY 1 aus C.\\nreinhardtii wurden unter Verwendung eines chim\\xe4ren Reporterkonstruktes\\n\\xfcberpr\\xfcft. Hierdurch konnte gezeigt werden, dass ein in CHLAMY 1-\\nangereichertes Proteingemisch die Translation dieses Reporterkonstruktes in\\neinem zellfreien System um durchschnittlich 14,56 % reprimieren konnte.\\nDurch eine Molekularmassenbestimmung unter nativen und denaturierenden\\nBedingungen wurde der Aufbau von CHLAMY 1 aus mehreren Untereinheiten\\ngezeigt. Der native Komplex hat eine Gr\\xf6\\xdfe von ca. 160 kDa und besteht,\\nausgehend von den in dieser Arbeit durchgef\\xfchrten Experimenten unter\\ndenaturierenden Bedingungen, aus den drei Untereinheiten C1 bis C3.\\nDie Aufreinigung von CHLAMY 1 wurde in drei Schritten ausgef\\xfchrt: (a)\\nHerstellung eines Rohextraktes, (b) Durchf\\xfchrung einer 0,5-1 M AS-F\\xe4llung und\\n(c) Ausf\\xfchrung einer spezifischen RNS-Affinit\\xe4tschromatographie. Es konnten\\ndadurch drei f\\xfcr CHLAMY 1 spezifische Proteine mit den Molekularmassen 60,\\n50 und 44 kDa aufgereinigt werden. Durch eine Peptid-Sequenzierung wurden\\ninsgesamt neun Peptide mit einer L\\xe4nge von bis zu 24 Aminos\\xe4uren sequenziert.\\nHierbei wurde ein Peptid identifiziert, das Bestandteil der zwei Untereinheiten C1\\nund C2 ist.\\nIn Western Blot-Analysen mit C. reinhardtii-Rohextrakten und Peptid-\\nAntik\\xf6rpern wurde die Abundanz der CHLAMY 1-Untereinheiten \\xfcber einen\\nTag-Nacht-Verlauf bestimmt. Die Untereinheit C1 (60 kDa) scheint konstitutiv\\nexprimiert zu werden, wohingegen die Expression von C3 (44 kDa) von der\\ninneren Uhr kontrolliert zu sein scheint.\\nDurch die Sichtung einer Expressions-Genbank aus C. reinhardtii mit Peptid-\\nAntik\\xf6rpern wurden zwei f\\xfcr CHLAMY 1 kodierende cDNS-Fragmente isoliert\\nund durch EST-Klone aus dem Sequenzierungsprojekt von C. reinhardtii\\nRichtung 5\\u2019-Ende verl\\xe4ngert. Alle Peptide der Untereinheiten C1 und C2 konnten\\nin einer cDNS identifiziert werden, deren ORF f\\xfcr ein Protein von 51,73 kDa\\nkodiert. F\\xfcr die Untereinheit C3 wurde ein ORF identifiziert, der f\\xfcr ein Protein der Molekularmasse 45,00 kDa kodiert. In allen Proteinen wurden Regionen f\\xfcr\\nm\\xf6gliche posttranslationale Modifikationen identifiziert.\\nIm Rahmen dieser Arbeit konnte gezeigt werden, dass \\u201eUG\\u201c-Bindeproteine auch\\nin anderen Organismen vorkommen. CHLAMY 1 kann spezifisch an die 16\\n\\u201eUG\\u201c-Wiederholungen in der 3\\u2019-NTR der regA-mRNS aus V. carteri binden. In\\ndieser Kugelalge wurde au\\xdferdem ein RNS-Bindeprotein (VOLVO 1)\\nidentifiziert, das spezifisch an diese \\u201eUG\\u201c-haltige Region bindet. Im Pilz N.\\ncrassa konnte ein CHLAMY 1 analoges Protein identifiziert werden (CRASSA\\n1), das an die sieben \\u201eUG\\u201c-Wiederholungen in der 3\\u2019-NTR von gs2wt aus C.\\nreinhardtii binden kann. Die Bindeaktivit\\xe4t in einem Tag-Nacht-Verlauf scheint\\nvon der circadianen Uhr gesteuert zu werden.'